柱后衍生系統(tǒng)在河豚du素檢測的新應用

去年游族創(chuàng)始人遭人投毒致死，英年早逝令人惋惜。據(jù)某些報道稱其中的毒之一就是河豚du素。像這樣的河豚du素中毒事件在日常生活中也有發(fā)生。近日，廣東省衛(wèi)健委通報的廣東三起較大級別的食物中毒事件中，其中兩起為河豚du素中毒，且中毒兩人均死亡。

什么是河豚du素呢

河豚du素（tetrodotoxin，TTX），分子式為C₁₁H₁₇O₈N₃，是鲀魚類（俗稱河豚魚）及其它生物體內(nèi)含有的一種生物堿。

河豚du素為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一，曾一度被認為是自然界中毒性強的非蛋白類毒素。這種毒素主要作用于腸道，被腸道吸收后便會迅速作用于神經(jīng)末梢和神經(jīng)中樞，可高選擇性和高親和性地阻斷神經(jīng)興奮膜上鈉離子通道，阻礙神經(jīng)傳導，從而引起神經(jīng)麻痹而致死亡。
 

據(jù)調(diào)查顯示，河豚du素大部分存在于河豚當中，但是近幾年在蟾蜍、蠑螈、藍環(huán)章魚中也檢測到河豚du素的存在。越來越多的研究認為，河豚du素有可能是通過食物鏈傳播到海洋生物體內(nèi)的，并不只和河豚有關。

河豚體內(nèi)的毒性在各個部位不同，甚者季節(jié)也會影響河豚體內(nèi)的毒性。據(jù)研究顯示，河豚在生殖季節(jié)毒性大，且雌性大于雄性，而在不同部位中，卵巢>脾臟>肝臟>血液>眼睛>鰓耙>皮膚>精巢。一般情況下，河豚的肌肉中是不含有毒素的，但河豚死后內(nèi)臟中的毒素可少量地滲入肌肉中。
 

河豚du素化學性質(zhì)和熱性質(zhì)均很穩(wěn)定，一般家庭中的烹飪條件不能將其破壞，只有在高溫加熱30min以上或在堿性條件下才能被分解。而能將其破壞的條件要求較高，為220℃加熱20-60min。這種的毒素的發(fā)病期很短，短至10-30min，長至3-6h發(fā)病，發(fā)病急，如果搶救不及時，中毒后最快的10min內(nèi)死亡，最遲4-6h死亡。中毒后也缺乏有效的解救措施。所以，對于河豚du素的檢測尤為重要。
 

方法介紹

目前食品中河豚du素的檢測主要依據(jù)GB 5009.206-2016，包括小鼠生物法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-熒光檢測法和酶聯(lián)免疫吸附法。其中小鼠生物法雖為世界普遍的參考方法，但存在小鼠個體差別大導致結果異常的現(xiàn)象；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法儀器成本高，對操作人員水平要求嚴格；酶聯(lián)免疫吸附法屬于半定量方法且商品化試劑盒較少；故采用液相色譜-熒光檢測法。

為保證檢測結果更加精準可靠，普瑞邦特對該方法進行優(yōu)化，采用諾爾液相搭配Pribolab^®MDS多功能光電衍生系統(tǒng)進行河豚du素的檢測。經(jīng)液相色譜分離后，河豚du素在Pribolab^®MDS多功能光電衍生系統(tǒng)內(nèi)與高溫的氫氧化鈉溶液反應，生成具有強熒光效應的C₉堿，熒光檢測定量限為300ppb，滿足國標要求。

實驗條件

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色譜柱: C ¹⁸ 柱,柱長 150mm ,內(nèi)徑 4. 6mm ,粒徑 5 μ m ,或等效柱。

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流動相:乙腈 - 乙酸銨緩沖液( 5+95 ,體積比)。

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流速: 1. 0mL / min 。

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柱溫: 30℃ 。

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檢測波長:激發(fā)波長 385nm ,發(fā)射波長 505nm

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注：如需優(yōu)化后的方法，請與我們聯(lián)系

譜圖

上圖為1ppm河豚du素柱后衍生產(chǎn)物熒光譜圖

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