發(fā)布時(shí)間： 2022-07-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 439次
免疫親和柱基于抗原抗體反應(yīng)，特異性抗體連接在柱體內(nèi)，選擇性吸附樣品中的待檢物，雜質(zhì)不被吸附，流出柱外，柱上結(jié)合的目標(biāo)物再被特定的洗脫液洗下來(lái)，可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測(cè)定，是一種高效的前處理柱?？蛇x擇性吸附樣品液中的毒素，從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的純化作用，經(jīng)過(guò)柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。它與HPLC配合使用可達(dá)到快速測(cè)定的目的，以改善信噪比，提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。
免疫親和柱使用技巧：
1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高；
2、若樣品為復(fù)雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；
3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；
4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會(huì)對(duì)回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
5、不要在無(wú)水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥縮，影響質(zhì)量；
6、儲(chǔ)存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因?yàn)榫彌_液凍結(jié)，會(huì)嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對(duì)質(zhì)量影響很大；
7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強(qiáng)洗脫效果可加大甲醇體積。
免疫親和柱的選購(gòu)要求：
柱容量抗體：抗體的性質(zhì)決定了凈化效果，抗體交叉反應(yīng)多，凈化的物質(zhì)相對(duì)也多。廠家生產(chǎn)親和柱會(huì)從成本角度考慮，那么就會(huì)出現(xiàn)不同的柱容量，親和柱上連接的抗體越多，柱容量也相應(yīng)增加，對(duì)客戶(hù)來(lái)說(shuō)高柱容量對(duì)于高污染樣品減少了凈化次數(shù)，降低了成本。
重要的指標(biāo)：添加回收率是親和柱的重要回收指標(biāo)，再樣品提取方法適當(dāng)?shù)臈l件下，添加回收是檢測(cè)親和柱性能的重要參考指標(biāo)，請(qǐng)注意，空白樣品的污染值應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于添加值，這樣會(huì)減少誤差。一般添加回收率應(yīng)在80-110%之間為合格的親和柱產(chǎn)品。
柱的吸附量：由于小分子在溶液中會(huì)吸附到凝膠上，在檢查了添加回收率之后還應(yīng)柱的吸附量，一般我們?cè)谙疵摬襟E會(huì)給客戶(hù)提供可靠的說(shuō)明。
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